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掃描電鏡(SEM)生物標(biāo)本的制備是一個(gè)精細(xì)的過程,需要特別注意樣品的形態(tài)保持、干燥和導(dǎo)電性。以下簡(jiǎn)介掃描電鏡生物標(biāo)本制備的一般操作:
1. 取材:選擇適當(dāng)?shù)纳锊牧?,如組織或細(xì)胞,并迅速將其切取。對(duì)于組織取材,切除組織要快,并迅速浸入預(yù)冷的固定液中,以防止細(xì)胞自溶。
2. 固定:使用適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ?,?%-4%的戊二醛(glutaraldehyde),在4°C下固定1-2小時(shí)。戊二醛能較好地保存微細(xì)結(jié)構(gòu),但對(duì)組織抗原有一定影響。
3. 漂洗:用磷酸鹽緩沖液(PBS)在4°C下漂洗0.4-2小時(shí),中間需換液2次,以去除多余的固定液。
4. 脫水:使用一系列濃度遞增的乙醇或丙酮溶液進(jìn)行脫水,如50%、70%、80%、90% 至 100%,每次脫水15分鐘至30分鐘。
5. 臨界點(diǎn)干燥:為了避免樣品在干燥過程中發(fā)生形變,可以使用臨界點(diǎn)干燥器進(jìn)行干燥,這一步驟對(duì)于保持生物樣品的原始形態(tài)至關(guān)重要。
6. 導(dǎo)電處理:由于掃描電鏡需要在真空中進(jìn)行觀察,樣品必須能夠?qū)щ娨员苊怆姾煞e累??梢允褂媒饘倌z帶、噴金或鍍鉑等方法使樣品表面導(dǎo)電。
7. 樣品安裝:將干燥和導(dǎo)電處理后的樣品安裝到SEM專用的樣品托上。確保樣品穩(wěn)固,避免在高真空環(huán)境下樣品移動(dòng)或振動(dòng)。
8. 觀察:在SEM中進(jìn)行觀察前,可能需要對(duì)樣品進(jìn)行額外的處理,如噴金增加導(dǎo)電性,或使用冷臺(tái)減少樣品在觀察過程中的荷電現(xiàn)象。
9. 顯微鏡操作:在SEM中,通過調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)膮?shù),如加速電壓、工作距離等,進(jìn)行生物樣品的成像。
制備過程中,樣品的每個(gè)步驟都需小心操作,以保證最終成像的質(zhì)量和準(zhǔn)確性。此外,樣品制備的具體細(xì)節(jié)可能會(huì)根據(jù)樣品的類型和所需的特定信息有所不同。
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